Iranian Journal of Forensic Medicine

fa بهینه سازی روش استخراج DNAاز استخوان برای به دست آوردن ماده ژنتیکی از استخوان و دندان های باستانی Optimizing Bone DNA Extraction for Obtaining High Yield Genome of Ancient Teeth and Bones پزشکی قانونی Forensic Medicine مقاله پژوهشی Research Article زمینه و هدف: واکنش زنجیره ای پلیمراز (PCR) یکی از مهمترین ابزارهای تشخیصی ملکولی مدرن میباشد که ما را قادر میسازد تا به بررسی ابعاد مختلف ملکولی یک یاخته بپردازیم. از اصلیترین اجزاء آزمون واکنش زنجیره ای پلیمراز، DNA میباشد که با استفاده از آن و تکثیر بخشهای اختصاصی آن قادر خواهیم بود تا ابعاد مختلف حیاتی یک یاخته را مورد بررسی قرار دهیم. در این مطالعه ما با استفاده از بررسی گروهی از نمونههای باستانی متعلق به 3600 سال پیش شامل نمونههای استخوان و دندان باستانی کشف شده در منطقه بهشهر استان مازنداران، به بررسی و بهینه سازی روش استخراج DNA پرداختیم تا بتوانیم با کسب حداکثر ژنوم استخراج شده سالم به بررسی های بالینی و ژنومی بر روی آن ها بپردازیم. روش بررسی: در این مطالعه با استفاده از پروتکل تخلیصی قبل از استخراج و حذف مهارکنندههای واکنش زنجیره ای پلیمرازو سپس استخراج با استفاده از ذرات سیلیکا بید به بررسی نتایج استفاده از این روش بهینه شده پرداختیم.یافتهها: نتایج استخراج DNA در نمونه های مورد مطالعه در مطالعه حاضر به ترتیب 37ng/µl ، 25ng/µl، 7ng/µl ، 32ng/µl ، 18ng/µl ، 42ng/µl بودند که در 67% موارد دارای خلوص عالی و میزان جذب نوری 8/1 بودند. همچنین ژنوم استخراج شده در این مطالعه جهت بررسی های ژنومیک واکنش زنجیره ای پلیمراز مورد استفاده قرار گرفتند که در تمامی نمونه ها نتایج قابل قبولی را ارائه نمودند.نتیجهگیری: نتایج حاصل نشان از استخراج مناسب و خالص و قابلیت استفاده از این ژنوم در مطالعات ژنومی می داد. لذا این روش برای استخراج از انواع نمونه های استخوانی، دندانی و غیره که بافت قابل استخراج به سادگی در دسترس نمی باشد توصیه می گردد. Background: Polymerase chain reaction (PCR) is one of important molecular methods that let us to understand more about molecular aspects of cells. DNA is the most important part of PCR reaction, that its quality and amount has direct effect on final results. In this study, we aimed to develop a protocol for extracting DNA from samples of tooth and bone belong to 3600 years ago.Method: After grilling and cleaning all surface parts of bones and teeth we used buffers for removing calcium and other PCR inhibitors then, we used Silica beads for collecting all DNA in our samples. Findings: DNA extraction amounts were 37ng/µl, 25ng/µl, 7ng/µl, 32ng/µl, 18ng/µl, 42ng/µl. In 67% of samples, we had extractions with high purity according to nano-drop results. Extracted DNA were examined for Real Time PCR, beta-actin gene that we had good results.Conclusion: Results of this study showed that this developed protocol has a good yield of DNA with enough purity and removing PCR inhibitors. We recommend this protocol for applying in same samples and studies. استخراج DNA, استخوان, دندان, باستانی, سیلیکا, ژنوم, واکنش زنجیره ای پلیمراز DNA Extraction, Polymerase Chain Reaction, Ancient, Bone, Teeth, Silica 7 13 http://sjfm.ir/browse.php?a_code=A-10-136-5&slc_lang=fa&sid=1 Hossein Samadi Kafil حسین صمدی کفیل kafilhs@tbzmed.ac.ir 110031947532846002340 110031947532846002340 Yes Drug Applied Research Center, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran. مرکز تحقیقات کاربردی دارویی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران Mohammad Asghar zadeh محمد اصغرزاده 110031947532846002341 110031947532846002341 No , Infectious Disease and Tropical Medicine Research Center, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran مرکز تحقیقات بیماری های عفونی وگرمسیری، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران Elham Zeinal zadeh الهام زینال زاده 110031947532846002342 110031947532846002342 No Biotechnology Research Center, Tabriz University of Medical Sciences, Tabriz, Iran. مرکز تحقیقات بیوتکنولوژی، دانشگاه علوم پزشکی تبریز، تبریز، ایران Seyyed Baha Hossini Sarteshnizi سید بها حسینی سرتشنیزی 110031947532846002343 110031947532846002343 No Department of Archeology, Faculty of Humanities, Tarbiat Modarres University, Tehran, Iran. گروه باستان شناسی، دانشکده علوم انسانی، دانشگاه تربیت مدرس، تهران، ایران